【一文解決】氯丙嗪殘留測定前處理方法
氯丙嗪的危害及檢測目的
氯丙嗪屬于吩噻嗪類藥物，可作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，故被作為中樞多巴胺受體的阻斷劑，具有鎮(zhèn)靜、催眠、鎮(zhèn)吐、抗暈眩等功效。當(dāng)前，氯丙嗪常被一些養(yǎng)殖戶違規(guī)添加至家畜飼料中，目的是通過抑制家畜運(yùn)動來達(dá)到“短期育肥”的效果。或在家畜長途運(yùn)輸過程中減少其應(yīng)激反應(yīng)，進(jìn)而降低死亡率。氯丙嗪藥物的濫用造成其在動物體內(nèi)大量殘留，并通過食物鏈進(jìn)入人體，長期蓄積會引發(fā)人體食物中毒、肝臟和腎臟病變等，直接危害人體健康。目前，歐盟明令規(guī)定“不得在動物源性食品中檢出氯丙嗪”。我國也對氯丙嗪進(jìn)行了嚴(yán)格的限制，2020年生效實施的GB 31650-2019《食品安全?國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥大殘留*》中規(guī)定了氯丙嗪允許作治療使用，但不得在動物性食品中檢出。
本文闡述了如何將氯丙嗪從樣品基質(zhì)中分離提取出來，并經(jīng)過凈化后，轉(zhuǎn)化成液質(zhì)聯(lián)用儀可以檢測的形式。以提取、凈化為重點，依據(jù)國標(biāo)GB/T 20763-2006，為檢測人員和相關(guān)領(lǐng)域研究人員提供一定的參考。
檢測項目：氯丙嗪
——————應(yīng)用范圍：豬腎/肌肉組織——————
液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法
方法原理：氯丙嗪在堿性條件下用特丁基甲醚提取，并通過向提取液中加入磷酸鹽緩沖液（pH =3），使氯丙嗪被提取到緩沖溶液中，并用特丁基甲醚凈化緩沖溶液，改變緩沖溶液為堿性，將氯丙嗪反提取到特丁基甲醚中，濃縮，定容。供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，外標(biāo)法定量。
前處理儀器：電子天平（感量0.1 mg和0.1 g）；離心機(jī)（大轉(zhuǎn)速為10000 r/min）；離心管（錐形底玻璃離心管15 mL和10 mL具塞；錐形底聚丙烯離心管50 mL具螺旋蓋）；過濾器（聚四氟乙烯膜0.2 μm×13 mm；尼龍膜0.2 μm×47 mm）；液體分配器（1 mL～10 mL和5 mL～50 mL）；微量移吸器（10 μL～100 μL和100 μL～1000 μL）；流動相過濾裝置；氮氣濃縮儀；高速渦流混合器；振蕩器；食物調(diào)理機(jī)；一次性移液管；酸度計（測量精度為±0.02 unit）；超聲波儀；一次性注射器（1 mL）；試樣瓶（2.0 mL）。
檢測儀器：HPLC-MS/MS+ESI源
試樣制備
豬腎要去除脂肪和其他的非腎臟組織，豬肉要去皮和骨頭。將其絞碎拌勻。分出0.5 kg作為試樣，將制備好的試樣密封，并做上標(biāo)記。將試樣置于-18 ℃條件下貯存。
前處理方法
1.提取
稱取試樣2.00 g（精que到0.01 g）放入50 mL聚丙烯離心管中，加入200 μL乙腈進(jìn)行渦流混合，混合后加入400 μL 5 mol/L*溶液，并進(jìn)行渦流混合30 s。在（80±5）℃水浴中放置1 h。在此期間，要對每個測定樣品進(jìn)行兩次渦流混合。1 h后，將樣品從水浴中取出并冷卻至室溫。加入12 mL特丁基甲醚，置于振蕩器上高速振蕩15 min，離心15 min（轉(zhuǎn)速為4000 r/min）。吸出上清液，定量將特丁基甲醚轉(zhuǎn)移到干凈的15 mL玻璃離心管內(nèi)，待凈化。
2.凈化
將上述15 mL離心管中加入1 mol/L磷酸二氫鉀溶液（pH=3）3 mL，振蕩10 min，離心10 min（4000 r/min）。將特丁基甲醚層吸出棄去。在磷酸鹽溶液中加入2 mL特丁基甲醚，振蕩5 min，離心5 min（4000 r/min），吸出特丁基甲醚層，棄去。然后再在磷酸鹽緩沖溶液中加入2 mL特丁基甲醚重復(fù)上述步驟。加入1 mL 5 mol/L*溶液搖勻后加入10 mL特丁基甲醚，振蕩15 min，離心5 min（4000 r/min）。定量吸取特丁基甲醚轉(zhuǎn)移到干凈的10 mL離心管中。在40 ℃條件下用氮吹儀蒸發(fā)至干。在濃縮至干的提取物中加入1000 μL流動相溶液，進(jìn)行渦流混合，超聲處理10 min。用0.2 μm×13 mm的聚四氟乙烯注射式過濾器過濾樣液，將樣液轉(zhuǎn)移到試樣瓶中，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。
國標(biāo)解讀
1.氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用無水乙醇配成0.10 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，在2 ℃～4 ℃避光保存，有效期一年。
2.該國標(biāo)通過改變提取溶液的pH值使氯丙嗪在特丁基甲醚和緩沖鹽溶液之間轉(zhuǎn)移，達(dá)到凈化的目的。
3.移取特丁基甲醚的過程中，注意離心后輕拿輕放，保證液面分層清晰，準(zhǔn)確取出全部有機(jī)層溶劑。
4.在氮氣濃縮過程中注意控制溫度不要超過40 ℃，氣流在液面上方0.5 cm處緩緩吹出，隨著液面下降調(diào)整氣針高度，使有機(jī)溶劑吹至近干狀態(tài)。
5.氮氣濃縮定容后，先渦旋再超聲，保證目標(biāo)化合物充分溶解下來。
6.如果有條件，建議使用氯丙嗪同位素內(nèi)標(biāo)進(jìn)行回收率的校正。
參考文獻(xiàn)
GB/T 20763-2006 豬腎和肌肉組織中乙酰丙嗪、氯丙嗪、氟哌啶醇、丙酰二甲氨基丙吩噻嗪、甲苯噻嗪、阿扎哌隆、阿扎哌醇、咔唑心安殘留量的測定 液相色譜―串聯(lián)質(zhì)譜法
圖1 豬腎和肌肉組織樣品中氯丙嗪殘留量測定的前處理流程圖
氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)信息表
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